摘要：本應(yīng)用簡報重點介紹了一種將 Agilent 7890B 或 8890 GC 與 Angilent 7010B 三重四極桿 GC/MS 系統(tǒng)聯(lián)用，測定并估算沙坦類成品藥和原料藥中 5 種痕量亞硝胺雜質(zhì) （NDMA、NDEA、NEIPA、NDIPA 和 NDBA）的全面解決方案。7010B 三重四極桿 GC/MS 配備高效離子源 (HES)，可提供出色的靈敏度、重現(xiàn)性和精密度，性能遠(yuǎn)超 法規(guī)限值的要求。該方法可達(dá)到的定量限 (LOQs) 僅為當(dāng)前法規(guī)要求的 1/20–1/2。

前言：從 2018 年 7 月開始，F(xiàn)DA 宣布召回纈沙 坦，因為這種藥物中含有 N-亞硝基二甲 胺 (NDMA)。對所有制造商的血管緊張素 受體阻滯劑 (ARB) 類活性藥物成分 (API) 和成品藥的后續(xù)調(diào)查也導(dǎo)致了纈沙坦、厄 貝沙坦和氯沙坦被額外召回。已發(fā)現(xiàn)這 些藥品中含有 NDMA 和 N-亞硝基二乙胺 (NDEA)，兩者均為已知動物致癌物和疑 似人類致癌物。 隨后，N-亞硝基異丙胺 (NEIPA)、N-亞 硝基二異丙胺 (NDIPA)、N-亞硝基二丁 胺 (NDBA) 和 N-亞硝基甲基-4-氨基丁酸 (NMBA) 等其他雜質(zhì)均被標(biāo)記為潛在的亞 硝胺雜質(zhì)。迄今為止，1100 多個不同批 次的沙坦類藥物（纈沙坦、氯沙坦和厄貝 沙坦）已被召回，因為其中所含的這些雜 質(zhì)已超過了臨時限值。 FDA 檢測與研究辦公室 (OTR) 發(fā)布了這幾 種雜質(zhì)的幾種分析方法，其中新方法使 用單四極桿 GC/MS 與頂空進(jìn)樣分析 4 種 雜質(zhì)，以及使用三重四極桿 GC/MS/MS 與液體進(jìn)樣分析 5 種雜質(zhì)。單四極桿 MS 的檢測結(jié)果常常不準(zhǔn)確，且靈敏度較低。 相比之下，GC/MS/MS 更容易在這類情 形下獲得特異性，比 GC/MS 方法更合適。我們將 7890B 或 8890 GC 與 7010B GC/MS/MS 聯(lián)用，使用 OTR 方法進(jìn)行 分析，發(fā)現(xiàn)兩種系統(tǒng)對 5 種雜質(zhì)均表現(xiàn) 出出色的性能。HES 具有更高的電離效 率，產(chǎn)生的離子數(shù)量增加了 20 倍，可實 現(xiàn)可靠的痕量分析。8890 GC 由觸摸屏界 面而非鍵盤來控制，可實現(xiàn)診斷測試、系 統(tǒng)監(jiān)測預(yù)警和遠(yuǎn)程訪問。

實驗部分 樣品前處理 本次分析測試的 APIs 和成品藥包括纈沙 坦、奧美沙坦、厄貝沙坦和氯沙坦。準(zhǔn)確 稱量 500 mg API，加入 15 mL 一次性玻 璃離心管中，并用移液管加入 5 mL 內(nèi)標(biāo) 溶液（約 50 ng/mL NDMA:C13-d6 的二氯 甲烷溶液）。某些沙坦類藥物（如纈沙坦 和奧美沙坦）*溶于二氯甲烷，而另一 些（例如厄貝沙坦）則形成渾濁溶液或不 可溶。將這些樣品渦旋振蕩 1 分鐘，然后 放入離心機(jī)中，以 4000 rpm 的轉(zhuǎn)速離心 2.5 分鐘。使用一次性移液器，將約 2 mL 二氯甲烷層通過 0.45 µm 尼龍過濾器過 濾，然后轉(zhuǎn)移至 GC 樣品瓶中待分析。標(biāo)樣前處理 適當(dāng)稀釋標(biāo)樣儲備液，獲得以下濃度的 校準(zhǔn)溶液：100、80、40、20、10、5、 2.5 ng/mL，每份溶液均用二氯甲烷配 制，其中含 NDMA:C13-d6 作為內(nèi)標(biāo)。 儀器 使用配備 Agilent 7693A 自動液體進(jìn)樣器 的 Agilent 7890B 或 8890 GC 與 Agilent 7010B 三重四極桿 GC/MS 的聯(lián)用系統(tǒng)進(jìn) 行分析。氣相色譜儀配置 7697A 頂空進(jìn) 樣器，連接到多模式進(jìn)樣口 (MMI)。從進(jìn) 樣口端，將一根尺寸為 30 m × 0.25 mm， 1.0 µm 的 Agilent J&W VF-WAXms 毛細(xì) 管氣相色譜柱連接到 MS。 表 1 和表 2 顯示了 GC 和 MS 參數(shù)。

MS 采集方法 使用 OTR 方法中的 MRM 采集數(shù)據(jù)。 結(jié)果與討論 化合物間達(dá)到了足夠的分離度，目標(biāo)峰與 溶劑和基質(zhì)峰也充分分離。所有 5 種化 合物的保留時間均與 FDA 法規(guī)中所提供 的數(shù)據(jù)保持一致（圖 1 和圖 2）。 使用線性擬合繪制校準(zhǔn)曲線。FDA 要求相 關(guān)系數(shù) (R2 ) ≥ 0.998。本研究的所有 5 種 雜質(zhì)均獲得了出色的線性，R2 > 0.999， 如圖 3A (7890B GC) 和圖 3B (8890 GC) 所示。

結(jié)論 7890B-7010B 和 8890-7010B GC/MS/MS 聯(lián)用系統(tǒng)對所有 5 種亞硝胺藥物雜質(zhì)均 表現(xiàn)出相似的出色性能。8890 GC 可實現(xiàn) 診斷測試、系統(tǒng)監(jiān)測預(yù)警以及觸摸屏控制 和遠(yuǎn)程訪問。7010B 三重四極桿 GC/MS 的設(shè)計包含 HES，與 7890B 和 8890 GC 提供的惰性樣品流路結(jié)合后，可降低痕量 雜質(zhì)的檢測限。這些特性使系統(tǒng)對所有 5 種殘留實現(xiàn)了可靠定量。改進(jìn)的 LOQs 僅為建議水平的 1/20–1/2，可在不更改 方法參數(shù)的前提下進(jìn)行高靈敏度分析。