應(yīng)用優(yōu)勢(shì)：

■ 利用色譜和高選擇性的質(zhì)譜檢測(cè)提高 分析選擇性

■ 寬的動(dòng)態(tài)范圍(范圍拓寬200倍)

■ 樣品制備過(guò)程簡(jiǎn)單、經(jīng)濟(jì)，僅使用極少 量的樣品

■ 分析速度快

白消安是一種雙功能烷基化試劑，其生物利用度受個(gè)體年齡、疾病狀態(tài)和藥 物相互作用等因素的影響，在不同個(gè)體間差異極大1 。高準(zhǔn)確度、高靈敏度且 高選擇性的分析方法可在白消安的藥代動(dòng)力學(xué)和藥效動(dòng)力學(xué)研究中發(fā)揮重要 作用。 本應(yīng)用紀(jì)要介紹了一種臨床研究方法，使用溶于甲醇的白消安-2 H8 內(nèi)標(biāo)對(duì)血漿 樣品進(jìn)行去蛋白處理，然后使用配備WatersTM ACQUITY UPLCTM HSS T3色譜 柱的ACQUITY UPLC I-Class系統(tǒng)進(jìn)行色譜分離，所需時(shí)間僅2.5 min，后在 XevoTM TQD質(zhì)譜儀上進(jìn)行檢測(cè)。 

實(shí)驗(yàn)： LC條件 MS條件 數(shù)據(jù)管理 方法條件 白消安有證參比溶液及其穩(wěn)定同位素內(nèi)標(biāo)(2 H8 )購(gòu)自Qmx(英國(guó)艾塞克斯郡薩克斯泰德)。使用購(gòu)自Golden West Biologicals(美國(guó)加利福 尼亞州特曼庫(kù)拉)的混合血漿作為替代基質(zhì)制備校準(zhǔn)品。白消安的校準(zhǔn)范圍為0.025～5 µg/mL。使用相同的混合血漿制備濃度為 0.05、0.75、1.5和3.5 µg/mL的QC樣品。

樣品萃取：向50 µL樣品中添加250 µL溶于甲醇的 0.1 µmol/L內(nèi)標(biāo)(ISTD)，旋渦混合30 s，在16100 g下離心2 min。然后取50 µL上清液添加到 950 µL水中配制成終萃取物用于UPLC-MS/MS分析。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果：在上述色譜條件下，白消安與磷脂實(shí)現(xiàn)了色譜分離。圖2是低濃度校準(zhǔn)品和內(nèi)標(biāo)的典型色譜圖。 在分析白消安濃度高達(dá)10 µg/mL的血漿樣品之后，未觀察到系統(tǒng)殘留污染。 分析靈敏度研究結(jié)果表明，該方法可以定量分析0.020 µg/mL的白消安(RSD < 20%，偏差< 15%)。 精密度評(píng)估試驗(yàn)設(shè)計(jì)為五天內(nèi)每天萃取并定量分析四個(gè)不同濃度的QC樣品(每個(gè)濃度五個(gè)重復(fù)樣，n = 25)。通過(guò)分析各QC水平的五 個(gè)重復(fù)樣評(píng)估方法的重現(xiàn)性。表3顯示了這些實(shí)驗(yàn)的結(jié)果，測(cè)定四個(gè)濃度水平的白消安的總精密度和重現(xiàn)性為RSD ≤ 7.3%。

將高濃度和低濃度白消安樣品按不同比例混合并進(jìn)行分析，結(jié)果表明該方法在0.0175～6.51 µg/mL的范圍內(nèi)呈線性。 本研究評(píng)價(jià)了血漿中含有低濃度(0.05 µg/mL)和高濃度(3.5 µg/mL)白消安時(shí)的基質(zhì)效應(yīng)(n=6)。低濃度下的基質(zhì)因子為0.92～1.06(平 均值0.99)，而高濃度下的基質(zhì)因子為0.99～1.12(平均值1.08)。使用白消安內(nèi)標(biāo)可補(bǔ)償這種基質(zhì)效應(yīng)，得到低濃度和高濃度下的基質(zhì)因 子分別為0.98～1.02(平均值0.99)和0.95～1.00(平均值0.98)。

通過(guò)在高/低濃度混合血漿樣品(0.05 µg/mL和3.5 µg/mL)中加入高濃度內(nèi)源性化合物(白蛋白、膽紅素、膽固醇、甘油三酸酯和尿酸) 和外源性物質(zhì)脂肪乳劑(20%乳化劑)，測(cè)定白消安的回收率(n = 3)。評(píng)估了這些物質(zhì)可能對(duì)分析造成的干擾，所得回收率范圍為 85.1%～106.1%。評(píng)估對(duì)乙酰氨基酚、氟康唑、酮康唑、伊曲康唑、苯妥英、泊沙康唑和伏立康唑?qū)Ψ治龅母蓴_作用，得到的回收率 范圍為93.2%～103.0%。導(dǎo)致回收率超出85%～115%范圍的物質(zhì)被視為干擾物。 采用該方法分析血漿樣品中白消安的濃度與采用另一種經(jīng)過(guò)驗(yàn)證的LC-MS/MS方法所得的結(jié)果之間具有良好的相關(guān)性，Deming回歸 方程為y = 1.01x + 0.04(n = 40，濃度范圍0.02～2.28 µg/mL，

結(jié)論：本研究開發(fā)了一種高靈敏度、高選擇性的分析（Waters Xevo TQD 三重四極桿液相質(zhì)譜聯(lián)用儀）血漿中白消安的臨床研究方 法。 此分析方法的樣品制備過(guò)程快速、經(jīng)濟(jì)，僅使用50 µL樣品即可在低濃度的 (0.025 µg/mL)白消安分析中達(dá)到足夠的分析靈敏度，并表現(xiàn)出優(yōu)異的精密 度。 實(shí)驗(yàn)證明該方法具有良好的線性，而且既無(wú)系統(tǒng)殘留又無(wú)基質(zhì)效應(yīng)。所得結(jié) 果與一種已建立的經(jīng)過(guò)驗(yàn)證的LC-MS/MS方法所得的結(jié)果具有良好的一致 性。 此方法可用于確定濃度-時(shí)間曲線下累計(jì)面積(曲線下面積，AUC)，對(duì)于白消 安的藥代動(dòng)力學(xué)和藥效動(dòng)力學(xué)研究具有重要的應(yīng)用價(jià)值。 感謝曼徹斯特醫(yī)院(英國(guó)曼徹斯特)臨床生物化 學(xué)部門的Ed Hinchlie為本研究提供匿名血漿樣 品。