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生命科學 | 譜聚醫(yī)療LC-MS/MS助力毒物臨床篩查

2023年10月11日 09:04 來源:聚光科技(杭州)股份有限公司

圖片  項目背景


作為農(nóng)業(yè)大國,我國對農(nóng)藥的使用歷史悠久、種類繁多。然而農(nóng)藥的使用給農(nóng)業(yè)帶來產(chǎn)量保證的同時,也由于把控不嚴,很容易產(chǎn)生濫用情況。污染環(huán)境是其一,更深層次的是容易使人誤食農(nóng)藥殘留超標的農(nóng)產(chǎn)品,輕則對人身健康造成危害,重則危及生命。


常見的農(nóng)藥主要包括有機磷類、擬------除----蟲------菊-----酯-----類、氨基甲酸酯類、除草劑及其它水溶性農(nóng)藥。大量研究表明,農(nóng)藥暴露與某些慢性疾病的發(fā)生率升高之間存在著聯(lián)系,包括癌癥、帕金森病、阿爾茨海默病、多發(fā)性硬化癥、糖尿病、心血管疾病、慢性腎臟病及不育癥等。此外,由于意外、自----殺或故意犯-----罪而導致的急性農(nóng)藥中毒案例也時見報道。


由于毒物分析所面對的測定對象多為未知物,并且含量較低,同時檢測樣品多為血液、尿液、組織及嘔吐物等復雜樣品,因此研究和尋找適合多種化合物同時分析,具有一定通用性的快速分析篩選方法就成為急救醫(yī)學的重要研究內(nèi)容之一。


隨著質(zhì)譜技術(shù)的發(fā)展,色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)(LC-MS/MS)由于具有靈敏度高、檢測范圍廣的特點,已成為較為成熟且被廣泛運用。


故根據(jù)臨床市場檢測需求,基于液質(zhì)平臺開發(fā)針對血液中常見數(shù)十種農(nóng)藥精準篩查的方法, 一方面可做到對農(nóng)藥中毒的定性診斷:對于一些患者診斷不明確,需要與中毒鑒別診斷時,可以第一時間實現(xiàn)農(nóng)藥中毒的定性診斷,為臨床醫(yī)生早期采取積極治療提供了客觀依據(jù);


另一方面可做到對于農(nóng)藥中毒的定量檢測:對于診斷明確的中毒患者,體內(nèi)毒物的定量檢測,不僅可以評估患者的預后,還可以指導制定最佳的毒物清除方案,如指導血液凈化清除相關毒物,既能防止對患者的過度醫(yī)療,浪費患者的物力財力、又能避免治療不足,增加患者的死亡風險。


圖片  臨床報道案例


患者信息:2019 年 9 月,甘肅省某男子在家中用餐后中毒死亡,經(jīng)調(diào)查其妻子在該名男子所喝菜湯中加入了農(nóng)藥,農(nóng)藥來自于一標有 “氯氰菊酯”字樣的塑料瓶,瓶內(nèi)農(nóng)藥已被倒光。送檢檢材包括塑料瓶的甲醇提取液約 5 mL,死者血液樣品約 3 mL。


臨床檢測:取 10 μL 塑料瓶提取液用甲醇逐級稀釋 1 000 倍進行分析,檢出高濃度的敵----敵----畏、毒死蜱和氯氰菊酯。


結(jié)果:取死者血液樣品 200 μL 按照本研究所建立的方法進行分析,檢出敵-------敵-------畏 189. 04 ng /mL,tR = 4. 93 min,定量離子對 220. 9 /109. 0( m/z) ; 毒死蜱 171. 32 ng /mL,tR =11. 79 min,定量離子對 349. 9 /197. 9( m/z) ; 氯氰菊酯 106. 50 ng /mL,tR =12. 73 min,定量離子對 433. 1 /191. 0( m/z) ,其色譜圖見下圖。


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三種農(nóng)藥的色譜圖


結(jié)論:實驗結(jié)果表明該LC-MS/MS方法可應用于實際案例的檢測,為法醫(yī)毒理學生物基質(zhì)中多農(nóng)藥的檢驗鑒定提供了高效可靠的途徑。


圖片  項目內(nèi)容



本研究結(jié)合實際中毒案例,選取了常見的數(shù)十種農(nóng)藥( 詳見第三部分藥物種類) 。結(jié)合高效液相色譜 -串聯(lián)質(zhì)譜(LC-MS /MS) 技術(shù)進行分析研究,通過優(yōu)化前處理和分析條件,建立了同時測定血液中農(nóng)藥的方法。該方法簡單高效,實現(xiàn)了一針進樣同時對數(shù)十種農(nóng)藥進行分析的目的,對臨床和法醫(yī)毒物檢驗工作具有重要意義。



圖片 儀器設備


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型號:PreMed 5200 (浙械注淮20222220115)

圖片 標準品、試劑


數(shù)十種農(nóng)藥標準品(20mg/L)、甲醇、甲酸銨、甲酸為色譜級,檸檬酸鈉、檸檬酸氫二鈉、氯化鈉、乙酸鈉、無水硫酸鎂為分析純,乙腈為色譜純。


圖片 質(zhì)譜條件


監(jiān)測模式為多反應監(jiān)測(MRM),部分化合物監(jiān)測離子對、碰撞電壓(CE)等參數(shù)見下表。


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圖片 樣品前處理


詳見杭州譜聚醫(yī)療的毒物篩選檢測試劑說明書。


圖片 結(jié)果


  • 典型圖譜。數(shù)十種農(nóng)藥的MRM疊加色譜圖如下圖所示:


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  • 重復性。經(jīng)過驗證,測得農(nóng)藥及其代謝物的峰面積重復性RSD均小于10%,滿足方法學驗證要求。




圖片  結(jié)論


項目建立了液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜同時測定血液中數(shù)十種農(nóng)藥的方法。該方法簡便快速、靈敏度高、穩(wěn)定性好,滿足了實際工作中一針進樣同時對數(shù)十種農(nóng)藥進行定性定量分析的需求,為臨床多農(nóng)藥的檢驗鑒定提供了高效可靠的途徑。


圖片  藥物種類


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圖片  解決方案


檢測方法:液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法(LC-MS/MS)


專業(yè)高效的檢測流程:血樣采集——>高通量的樣本前處理方案——>上機檢測——>自動審核數(shù)據(jù)及生成報告。


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儀器:超高效液相色譜儀(具體配有二元超高壓輸液泵、超高壓自動進樣器、柱溫箱)、PreMed 5200 液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜系統(tǒng)。


質(zhì)譜條件:使用APCI源,監(jiān)測模式為多反應監(jiān)測(MRM)。為提高檢測靈敏度,可根據(jù)保留時間分段監(jiān)測各化合物。


圖片  關于譜聚


聚光科技生命科學板塊旗下譜聚醫(yī)療是一家醫(yī)療臨床質(zhì)譜產(chǎn)品服務平臺,聚焦于質(zhì)譜硬件及配套個性化定制、臨床醫(yī)學樣本檢測體外診斷試劑盒產(chǎn)品及應用技術(shù)、臨床科研合作等領域,將竭誠為客戶提供集成化、自動化、標準化和流程化的臨床質(zhì)譜解決方案,使客戶享受一站式的定制化服務。并致力于提供普惠大眾的臨床質(zhì)譜技術(shù),推動中國臨床質(zhì)譜深入發(fā)展和突破卡脖子關鍵難題。


參考文獻:杜秋瑤,張云峰,王繼芬,超高效液相色譜 -串聯(lián)質(zhì)譜法同時測定血液中 115 種農(nóng)藥[J] 2020,39(4) : 485 ~ 491.




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