摘要：本文采用 Agilent 1290 Infinity 液相色譜系統(tǒng)/6460 三重四極桿液質(zhì)聯(lián)用系統(tǒng)建立 了同時檢測抗病du藥物金剛烷胺 (Amantadine) 和利巴韋林 (Ribavirin)的分析方 法。雞肉樣品經(jīng)提取金剛烷胺和利巴韋林后，分別采用 Agilent Bond Elut PCX 和 PBA 固相萃取柱凈化，采用薄殼型填料反相 C18 色譜柱 — Agilent Poroshell 120 SB-Aq 色譜柱分離，經(jīng)配有安捷倫噴射流 (AJS) 電噴霧離子源的安捷倫三重四極 桿液質(zhì)聯(lián)用系統(tǒng)在正離子模式下監(jiān)測。該方法在 0.1-50 ng/mL 濃度范圍內(nèi)線性相 關(guān)性良好，相關(guān)系數(shù) R2 ≥ 0.999；利巴韋林的添加回收率在 80%-101%、金剛烷胺 的添加回收率在 71%-79%。通過對方法靈敏度、精密度和線性范圍等方法學(xué)參 數(shù)進(jìn)行考察，得到所建立的方法能在 12 min 內(nèi)對 2 種抗病du藥物金剛烷胺和利 巴韋林完成快速、高靈敏度的檢測分析，*法規(guī)監(jiān)測要求。

前言：2013 年底央視曝光山東等地部分養(yǎng)殖戶在肉雞飼養(yǎng)過程中大量濫用抗生素、激 素和抗病毒類藥物，違規(guī)喂食金剛烷胺、利巴韋林等抗病du藥品的“速成雞” 流入上海百盛旗下餐飲機(jī)構(gòu)一事。美國快餐業(yè)*肯德基和麥當(dāng)勞在中國被卷 入“速成雞”風(fēng)波，引發(fā)上海人士和全國消費(fèi)者的廣泛關(guān)注和擔(dān)憂！農(nóng)業(yè)部對 此事件高度重視，及時責(zé)成山東有關(guān)部門去調(diào)查處理這件事情，也派出了專家 組奔赴山東。以往文獻(xiàn)報道采用 LC/QQQ 分析血漿中利巴韋林或動物源食品中金 剛烷胺[1-3]，但沒有此次事件中被曝光的抗病毒類藥物利巴韋林和金剛烷胺同時 檢測的國家標(biāo)準(zhǔn)和方法，這為相關(guān)政府執(zhí)法檢測部門、生產(chǎn)企業(yè)和第三方實(shí)驗 室迅速開展監(jiān)督檢查帶來了技術(shù)上的困難。

安捷倫科技作為分析儀器業(yè)界品牌，多年來一直致力 于為食品安全領(lǐng)域提供強(qiáng)有力的產(chǎn)品、技術(shù)、解決方案。 為應(yīng)對此次食品安全突發(fā)事件，安捷倫科技為廣大分析工 作者提供了分析檢測雞肉中抗病毒類藥物利巴韋林和金剛 烷胺的完整解決方案。

實(shí)驗部分 試劑、化學(xué)品與消耗品 所有試劑和溶劑均為色譜純級或者分析純級。甲醇、乙 腈和異丙醇購自德國默克 (MERCK)。甲酸、乙酸銨、三lv乙酸和氨水購自美國 Sigma-Aldrich 公司。所用實(shí)驗用水為 Millipore Milli-Q 超純水系統(tǒng)現(xiàn)制備的高純?nèi)ルx子水。金剛烷胺 和利巴韋林標(biāo)準(zhǔn)品由北京出入境檢驗檢疫局技術(shù)中心提供。 所有標(biāo)準(zhǔn)品用甲醇配制為 1 mg/mL 儲備液，儲存在 -20 °C 冰 箱內(nèi)（有效期 1 年左右）。用乙腈:水 (50:50) 配制混合工作液 (10 µg/mL)，儲存在 4 °C 下（有效期半個月左右）。使用時 用水對混合工作液進(jìn)行適當(dāng)逐級稀釋后使用，現(xiàn)配現(xiàn)用。 實(shí)驗采用 Agilent Bond Elut PCX 和 PBA 固相萃取柱對樣品提 取液進(jìn)行凈化。

儀器配置 實(shí)驗采用 Agilent 1290 Infinity 液相色譜系統(tǒng)進(jìn)行分離，其由 下列部件組成： • Agilent 1290 Infinity 二元泵 (G4220A) • Agilent 1290 Infinity 標(biāo)準(zhǔn)自動進(jìn)樣器 (G4226A) • Agilent 1290 Infinity 自動進(jìn)樣器冷卻器 (G1330B） • Agilent 1290 Infinity 柱溫箱 (G1316C) 采用配有安捷倫噴射流 (AJS) 電噴霧離子源的 Agilent 6460 三重四極桿液質(zhì)聯(lián)用系統(tǒng)，在正離子模式下進(jìn)行檢測。 采用 Agilent MassHunter 工作站軟件（B.07 或以上版本）進(jìn) 行數(shù)據(jù)采集、定性和定量分析。 樣品前處理 稱取 2 g 雞肉樣品（精確至 0.01 g）至 15 mL 離心管中，依次 加入已知濃度的混合工作液、5 mL 的甲醇:1% 三氯yi酸水溶 液（50:50，V/V），渦旋 30 s，超聲 30 min，5000 r/min 離心 10 min，上清液全部轉(zhuǎn)移至 15 mL 離心管中；再加入 5 mL 的 甲醇:1% 三氯yi酸（50:50，V/V）重復(fù)提取一次，合并全部 提取液；渦旋均勻后重新離心，取出 5 mL 上清液，過 PCX 和 PBA 固相萃取柱進(jìn)行凈化，流程圖如圖 1 所示。

結(jié)果與討論 本文采用含有薄殼型填料顆粒的 Poroshell 120 SB-Aq 色譜 柱對利巴韋林和金剛烷胺進(jìn)行了有效的色譜分離。流動相 中添加 0.1% 甲酸和 5 mmol/L 乙酸銨可以促進(jìn)正模式下的 離子化效率。根據(jù)利巴韋林和金剛烷胺的結(jié)構(gòu)，實(shí)驗可以 采用電噴霧離子源正離子模式測試。實(shí)驗結(jié)果表明，利巴 韋林可以生成 [M+H]+ (m/z 245.1) 和 [M+Na]+ (m/z 267.1) 分 子離子峰，金剛烷胺可以生成 [M+H]+ (m/z 152.2) 分子離子 峰；分別選擇 [M+H]+ 峰進(jìn)行子離子掃描，最終確認(rèn)利巴韋 林選擇 m/z 113（定量子離子）和 96（定性子離子）、金剛 烷胺選擇 m/z 135（定量子離子）和 93（定性子離子）作為 多反應(yīng)通道監(jiān)測離子對，所得 MRM 譜圖如圖 2 所示。 在雞肉樣品基質(zhì)中含有對利巴韋林色譜峰有干擾的物質(zhì)， 影響結(jié)果測定。實(shí)驗發(fā)現(xiàn)采用 SB-Aq 類型柱填料的色譜柱 在 100% 水相流動相條件下起始，可以實(shí)現(xiàn)干擾物與利巴韋 林的基線分離，避免定性定量的干擾，如圖 3 所示。實(shí)驗 發(fā)現(xiàn)采用 PCX 固相萃取柱對金剛烷胺凈化時，洗脫液中必 須添加 25% 以上的異丙醇才能解吸下來。

結(jié)論 采用 1290 Infinity 液相色譜系統(tǒng)/6460 三重四極桿液質(zhì)聯(lián)用系統(tǒng)成功的實(shí)現(xiàn)了對雞肉中抗病毒類藥物金剛烷胺和利巴 韋林殘留量的高靈敏、快速的確證定量分析。本方法采用 Bond Elut PCX 和 PBA 固相萃取柱有效的實(shí)現(xiàn)了樣品的凈化。 本文所述完整的解決方案可以滿足對雞肉制品中抗病物的快速監(jiān)督和監(jiān)測。