摘要：本文采用 Agilent 1290 Infinity 液相色譜系統(tǒng)/6460 三重四極桿液質(zhì)聯(lián)用系統(tǒng)建立 了 56 種抗生素（包括磺胺、喹諾酮、四環(huán)素、β-內(nèi)酰胺、大環(huán)內(nèi)酯、林可胺類 等）同時檢測的分析方法。牛奶或乳粉經(jīng)過乙腈沉淀蛋白提取后，經(jīng)反相固相 萃取柱通過式凈化后，采用薄殼型填料反相 C18 色譜柱 — Agilent Poroshell 120 EC-C18 分離，經(jīng)配有安捷倫噴射流 (AJS) 電噴霧離子源的安捷倫三重四極桿液質(zhì) 聯(lián)用系統(tǒng)在正離子模式下監(jiān)測。該方法在 0.1–200 ng/mL 濃度范圍內(nèi)線性相關(guān)性 良好，相關(guān)系數(shù) R2 ≥ 0.990；在 5 ng/mL 添加濃度下，各化合物峰面積穩(wěn)定性在 0.40%-14.02% 之間；各化合物儀器定量檢測限 (LOQ) 可達到 0.02-2.0 ng/g。通過 對方法靈敏度、精密度和線性范圍等方法學參數(shù)進行考察，得到所建立的方法 能在 18 min 內(nèi)對乳品中 56 種抗生素類目標化合物完成快速、高靈敏度的檢測分 析，*法規(guī)監(jiān)測要求。

前言：乳及乳制品是指以生鮮牛（羊）乳及其制品為主要原料，經(jīng)加工而制成的各種產(chǎn) 品，其已成為人們非常喜愛的日常食品之一。隨著全球經(jīng)濟一體化和食品貿(mào)易國 際化，乳及乳制品的質(zhì)量安全已成為世界性的挑戰(zhàn)和全球重要的公共衛(wèi)生問題。 其中獸藥殘留問題是影響其安全的最重要的因素之一。獸藥是指用于預防、治 療、保健、診斷動物疾病或者有目的調(diào)節(jié)動物生產(chǎn)性能的藥物及其制品，可以有 效控制動物的疫情，提高動物的存活率，保證養(yǎng)殖業(yè)的健康發(fā)展。如果使用不當 或者非法使用藥物，過量的藥物就會殘留在動物體內(nèi)，當人食用了獸藥殘留超標 的動物性食品后，就會在體內(nèi)積蓄，產(chǎn)生過敏、畸形、癌癥等不良后果，直接危 害人體的健康甚至生命。目前我國乳制品中仍然存在著一些獸藥殘留超標的問題。 在歷年國家質(zhì)檢總局組織開展的乳制品風險監(jiān)測項目中， 已經(jīng)展開的獸藥殘留檢測包括氯霉素、青霉素類、磺胺 類、四環(huán)素類、激素等。不同抽檢批次的樣品均有獸殘檢 出。根據(jù)中華人民共和國農(nóng)業(yè)部發(fā)布的第 235 號公告《動 物性食品中獸藥最高殘留*》，可以用于產(chǎn)奶動物但不得 在乳制品中檢出殘留的獸藥共有 8 種；禁止用于產(chǎn)奶動物 的獸藥共有 39 種，其中 29 種獸藥禁止用于所有食品動物， 10 種獸藥禁止用于產(chǎn)奶動物或特定種類的產(chǎn)奶動物[1-2]。 目前乳及乳制品中獸藥殘留檢測方法及標準多采用液質(zhì)聯(lián) 用法，但大都按獸藥類別單獨檢測，開發(fā)同時高效檢測乳 品中多獸藥殘留的技術(shù)方法可以提高檢測效率和通量，也 是獸藥殘留檢測技術(shù)的發(fā)展方向[3-5]。本文采用 Agilent 1290 Infinity 液相色譜系統(tǒng)/6460 三重四極桿液質(zhì)聯(lián)用系統(tǒng)建立了 同時快速檢測乳及乳制品中 56 種抗生素的確證定量方法， 該方法可以滿足對乳品中常見獸藥殘留的監(jiān)測。

實驗部分 試劑、化學品與消耗品 所有試劑和溶劑均為色譜純級或者分析純級。甲醇和乙 腈購自德國默克 (MERCK)。甲酸和乙酸銨購自美國 SigmaAldrich 公司。所用實驗用水為 Millipore Milli-Q 超純水系統(tǒng) 現(xiàn)制備的高純?nèi)ルx子水。 標準品由天津乳品檢測中心提供。所有標準品用甲醇配制 為 1 mg/mL 儲備液，儲存在 -20 °C 冰箱內(nèi)（有效期 1 年左 右）。用乙腈:水 (50:50) 配制混合工作液 (10 µg/mL)，儲存 在 4 °C 下（有效期 1 個月左右）。使用時用乙腈:水 (10:90) 對混合工作液進行適當逐級稀釋后使用，現(xiàn)配現(xiàn)用。 實驗采用 Agilent Bond Elut Plexa 固相萃取 (SPE) 柱對樣品提 取液進行凈化。

儀器配置 實驗采用 Agilent 1290 Infinity 液相色譜系統(tǒng)進行分離，其由 下列部件組成： • Agilent 1290 Infinity 二元泵 (G4220A) • Agilent 1290 Infinity 標準自動進樣器 (G4226A) • Agilent 1290 Infinity 自動進樣器冷卻器 (G1330B） • Agilent 1290 Infinity 柱溫箱 (G1316C) 采用配有安捷倫噴射流 (AJS) 電噴霧離子源的 Agilent 6460 三重四極桿液質(zhì)聯(lián)用系統(tǒng)，在正離子模式下進行檢測。 采用 Agilent MassHunter 工作站軟件（B.07 或以上版本）進 行數(shù)據(jù)采集、確證和定量分析。 樣品前處理 稱取 1 g 牛奶（精確至 0.1 g）于 15 mL 聚丙烯離心管中，加 入 3 mL 乙腈，渦旋 30 s，以 10000 r/min 離心 10 min，取上 清液于 15 mL 離心管中，再加入 1 mL 乙腈重復提取沉淀蛋 白部分，將兩次提取液合并，直接通過 Bond Elut Plexa SPE 柱，在重力作用下收集全部流出液于 15 mL 離心管中，再 取 0.5 mL 乙腈:水（80:20，V/V）洗脫 SPE 柱，收集全部洗 脫液，合并流出液和洗脫液，35 °C 水浴上氮氣吹至約 0.6 mL，用水定容至 1 mL，渦旋混勻，過濾膜后上機測定。 稱取 0.1 g 奶粉（精確至 0.1 g）于 15 mL 聚丙烯離心管中， 加 1 mL 水混勻，加 4 mL 乙腈渦旋 30 s，以 10000 r/min 離 心 10 min，后面步驟同牛奶處理方法。

結(jié)果與討論 本文采用含有薄殼型填料顆粒的 Poroshell 120 EC-C18 色譜 柱對乳品中 56 種抗生素進行了有效的色譜分離，此填料 (2.7 µm) 和規(guī)格 (3.0 x 100 mm) 的色譜柱具有較高的分離柱 效，同時具有較低的色譜壓力和較高的柱載量，非常適合 分析乳品基質(zhì)中多藥物殘留。流動相中添加 0.1% 甲酸和 2.5 mmol/L 乙酸銨可以促進正模式下的離子化效率。