MS/MS 檢測(cè) API 4000™ LC-MS/MS液質(zhì)聯(lián)用系統(tǒng)，Turbo V™離子源，正離子 / 負(fù)離子模式，MRM掃描方式。 

樣品制備（肉產(chǎn)品）[1]

1．試樣代表性部位，以搗碎機(jī)進(jìn)行充分勻化。勻化后的試樣在分析前一直冷凍保存。

2．稱取（2.5±0.05) g均勻試樣置于離心管底部。分別制備四份空白組織試樣及一份對(duì)照試樣、三份 添加標(biāo)準(zhǔn)的試樣。在對(duì)照試樣中加入100 µL純DMSO。在組織試樣中加入50 µL DMSO。在空白組織試樣 和組織試樣中分別加入50 µL 10 µg/mL工作溶液。然后在已加入50 µL 10 µg/mL工作溶液的三個(gè)空白組織試 樣中分別加入50 µL 20、10、5 µg/mL工作溶液。

3．制備的每一試樣中加入2.5 mL 6 mol/L HCl，蓋好，將試樣管放到（110±4) ℃的烘箱內(nèi)。

4．1 h后把試樣從烘箱中取出，將試樣管放于干冰或冰上約5 min，冷卻至室溫。

5．向每個(gè)試樣中加入2.0 mL水，以渦式混勻器混勻試樣，用pH計(jì)監(jiān)測(cè)pH值。慢慢加入足量(約1.23 g) 的碳酸鈉，加入時(shí)間需4～5 min，調(diào)節(jié)pH至8～9.5。

6．向每個(gè)試樣內(nèi)加入15 mL乙酸乙酯，蓋上塞子，平放于試管架上，振搖5 min。然后取下塞子，于 4000 r/min將試樣離心5 min。

7．用吸移管將乙酸乙酯提取液轉(zhuǎn)入另一50 mL玻璃離心管內(nèi)，應(yīng)盡量轉(zhuǎn)移*。

8．重復(fù)操作步驟6和7，再次提取每個(gè)試樣，把相應(yīng)的提取液合并于各自的50 mL離心管內(nèi)。

9．向每個(gè)合并的乙酸乙酯提取液中加入4.0 mL 1 mol/L HCl，蓋上塞子，平放于試管架上振搖5 min。取 下塞子于4000 r/min離心5 min。

10．盡量*吸去乙酸乙酯相。在（35±5) ℃水浴上蒸去水溶液上殘留的乙酸乙酯。

11．用渦式混勻器將試樣混勻，同時(shí)慢慢加入足量(約0.33 g)碳酸鈉，加入時(shí)間需1～2 min。用pH計(jì) 監(jiān)測(cè)pH值，每個(gè)試樣的pH值應(yīng)為8～9.5。

12．每個(gè)試樣中加入20 mL甲苯，蓋上塞子平放于試管架上振搖5 min，取下塞子于4000 r/min離 心5 min。

13．盡量*吸去甲苯相。在（35±5) ℃的水浴上蒸去水相上殘留的甲苯。

14．對(duì)于每一個(gè)試樣，相對(duì)應(yīng)將一10 mL玻璃注射器用夾子固定在環(huán)形架上。注射器的路氏接頭前端 連接SEP-PAK C18柱體。

15．將每支柱用2 mL甲醇預(yù)洗，而后用2 mL 0.2 M磷酸鉀緩沖溶液(pH 8.0)洗滌。加入每種試劑后， 經(jīng)過安裝于注射器頂部的橡皮塞緩緩?fù)ㄈ氲獨(dú)?，?dāng)?shù)獨(dú)忾_始出柱時(shí)即停氣。氮?dú)饬魉?～2 mL/min。棄去 洗脫液。

16．從步驟13中得到的每一試樣水相轉(zhuǎn)入預(yù)先洗滌好的各注射器柱系統(tǒng)內(nèi)。用步驟14的方法，應(yīng)用 氮?dú)馐谷芤毫鹘?jīng)柱體洗提，然后各取每一試樣管水洗液1 mL(經(jīng)渦式混勻器混勻)，使用巴氏吸移管采用類 似方法將水洗液分別轉(zhuǎn)入各注射器柱系統(tǒng)內(nèi),棄去洗脫液。

17．再取每個(gè)試樣管水洗液1 mL(經(jīng)渦式混勻器混勻)，分別轉(zhuǎn)入各注射器柱系統(tǒng)內(nèi)，按步驟15的方 法應(yīng)用氮?dú)馐勾怂匆毫鹘?jīng)柱體洗提,棄去洗脫液。

18．向每一注射器柱系統(tǒng)內(nèi)分別加入2 mL甲苯，按步驟15的方法用氮?dú)馐辜妆搅鹘?jīng)柱體洗提，棄去 洗脫液。

19．在每一注射器柱系統(tǒng)下面分別放置一15 mL離心管，向每個(gè)柱系統(tǒng)內(nèi)加入2 mL乙酸乙酯，按步驟 15的方法用氮?dú)馐挂宜嵋阴チ鹘?jīng)柱體進(jìn)行洗脫。在這部分洗脫液中含有待測(cè)化合物。

20．向步驟19中得到的每份洗脫液中分別加入約0.5 mL甲醇，混勻，得到均勻的溶液。

21．至干后加入0.5 mL水 — 甲醇溶液(70＋30)，混勻，重新溶解殘?jiān)?

22．30 min后將每個(gè)重新溶解的試樣加入微量過濾裝置內(nèi)，采用0.2 µm濾膜過濾。然后將每個(gè)過濾器 及試樣提取液于4000 r/min離心5～10 min。

23．將濾液轉(zhuǎn)入15 mL具塞玻璃離心管內(nèi)，用水 — 甲醇(70＋30)調(diào)節(jié)每一濾液體積為0.5 mL?；靹蚝?移取0.1 mL供分析。

色譜分離條件 Agilent 1100 系統(tǒng)：G1312A二元泵系統(tǒng)、G1367A型自動(dòng)進(jìn)樣器、柱溫箱。 色譜柱：Inertsil ODS-3 150 mm×2.1 mm。 流速：200 µL/min。 流動(dòng)相：水 / 甲醇 + 5 mM 甲酸銨（pH=4.0）。 柱溫箱溫度：25 ℃；進(jìn)樣體積：20 µL。MS/MS 檢測(cè) API 4000™ LC-MS/MS液質(zhì)聯(lián)用系統(tǒng)