化學(xué)試劑 MG (孔雀石綠)     LMG (隱色孔雀石綠) C23H25N2    CAS: 2437-29-8    C23H26N2    CAS: 129-73-7     BG (亮綠)      CV (結(jié)晶紫) C27H33N2 CAS: 633-03-4    C25H30N3     CAS: 548-62-9   建議的內(nèi)標(biāo)：D5-LMG。

AB液質(zhì)聯(lián)用儀色譜分離流動相的制備： 1 M乙酸銨溶液：溶解77 g甲酸銨于1 L HPLC級的水中。 流動相A：在1 L HPLC級的水中，加入1 mL甲酸，10 mL 1 M乙酸銨溶液。 流動相B：在100 mL水中，加入1 mL甲酸，10 mL乙酸銨溶液，混勻后，用HPLC級的乙腈稀釋到1 L。

樣品制備（魚、水產(chǎn)品） 基于Bergwerff等人提出的方法[1]： 1．將2 mL pH=3.0的Mcllvaine溶液、100 mL 1 M的p-TSA、50 mL的N,N,N,,N,-四甲基-1,4-苯乙烯二胺的甲 醇溶液(1 mg/mL)進(jìn)行混合； 2．加入2 g勻漿的樣品于50 mL螺絲加蓋的聚丙烯管中； 3．渦旋混合； 4．加入12 mL乙腈； 5．振搖15 min； 6．15 ℃下，3400 r/min離心5 min； 7．加入pH=6.0的Mcllvaine溶液； 8．加入12 mL乙腈； 9．振搖15 min； 10．15 ℃下，3400 r/min離心5 min； 11．合并上清液；12．加入6 mL 二氯甲烷； 13．15 ℃下，3400 r/min離心5 min； 14．有機(jī)相進(jìn)行固相萃取。

基于Effkemann等人提出的方法[2]： 1．稱量2 g勻漿過的魚肉組織； 2．加入100 µL內(nèi)標(biāo)溶液(D5-LMG，1 µg/mL)； 3．加入900 µL水； 4．加入2 mL鹽酸羥胺溶液(5 g/L)； 5．振搖并放置10 min； 6．加入8 mL乙腈； 7．振搖10 min； 8．4 ℃下，3000 r/min離心5 min； 9．將上清液吸入樣品，備用。 注意：新鮮的魚肉提取后，應(yīng)在幾個小時(shí)內(nèi)完成分析，以防止孔雀石綠、隱色孔雀石綠的降解。

色譜分離條件 Agilent 1100 系統(tǒng)：G1312A二元泵系統(tǒng)、G1367A型自動進(jìn)樣器、柱溫箱。 AB液質(zhì)聯(lián)用儀色譜柱：Phenomenex Synergi Max-RP反相柱，50 mm×2 mm，4 µｍ，80 Å。 流動相：A相—水 + 0.1%甲酸 + 10 mM 乙酸銨；B相—水 / 乙腈(10 / 90) + 0.1%甲酸 + 10 mM 乙酸銨。 梯度設(shè)置：